实用肿瘤学杂志 ›› 2010, Vol. 24 ›› Issue (3): 238-242.doi: 10.3969/j.issn.1002-3070.2010.03.011
谢至, 陈志红, 郭爱林, 董嵩, 陈世良, 陈志勇, 宗飒, 唐红艳, 严红虹, 张绪超
XIE Zhi, CHENG Zhihong, GUO Ailin, DONG Song, CHEN Shiling, CHEN Zhiyong, ZONG Sa, TANG Hongyan, YAN Honghong, ZHANG Xuchao
摘要: 目的 由于常规10%中性甲醛固定的组织DNA提取质量较低,易发生断裂或降解,不利于保存及长片段DNA扩增。本研究比较70%乙醇与中性甲醛固定法对DNA质量及后续PCR的影响。方法 取70%乙醇固定的肺癌组织30例(其中10例固定7天以上),10%中性甲醛固定的自身配对癌组织30份。采用试剂盒提取DNA,分析条带完整性和纯度,并用PCR扩增HBB(beta globin)及SERPINA9(antitrypsin)两基因的不同长度片段,用琼脂糖凝胶电泳分析扩增产物。结果 70%乙醇固定组的基因组DNA经电泳条带整齐未见明显降解,而10%中性甲醛组DNA条带弥散,有可见降解。后续普通PCR扩增268bp、536bp的产物显示乙醇固定组产量明显高于10%中性甲醛固定组。实时荧光定量PCR也显示在扩增123bp、251bp、346bp三个不同长度片段时乙醇固定组产量均明显高于10%中性甲醛固定组(P<0.01)。中性甲醛组DNA在扩增346bp长度片段时成功率下降至47%(14/30)。乙醇固定时间长短对DNA的antitrypsin模板质量无明显差异。结论 70%乙醇固定法对肺癌组织DNA保存效果优于中性甲醛法,且更适合长片段DNA扩增。长时间乙醇固定法对DNA质量无明显影响,可适合于长途运输生物标本。
中图分类号: