实用肿瘤学杂志 ›› 2015, Vol. 29 ›› Issue (1): 17-21.doi: 10.11904/j.issn.1002-3070.2015.01.004
靳红1, 谢凯1, 张美丽1, 孙晶1, 董猷元2
JIN Hong1,XIE Kai1,ZHANG Meili1,SUN Jing1,DONG Youyuan2
摘要: 目的 构建针对cIAP1基因的慢病毒shRNA表达载体并稳定转染人卵巢癌Skov3细胞,观察该基因对卵巢癌细胞的影响。方法 设计合成针对cIAP1的shRNA重组质粒表达载体,并筛选出最有效的干扰序列,获取pGPU6-cIAP1-shRNA稳定表达细胞株。RT-PCR及Western blot检测转染组Skov3细胞cIAP1基因mRNA及蛋白表达的水平,MTT法检测细胞生长,绘制生长曲线。结果 测序验证针对cIAP1的shRNA重组质粒构建成功,并筛选cIAP1-2534为最佳干扰序列;流式细胞术分析cIAP1 shRNA载体的转染效率可达74.7%,RT-PCR及Western blot检测干扰组Skov3细胞的cIAP1基因mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。MTT实验结果显示干扰组细胞的OD值显著低于正常组细胞(P<0.05),干扰组细胞的生长速度明显慢于正常组(P<0.05)。结论 针对cIAP1基因的慢病毒shRNA表达载体可以有效抑制Skov3细胞中该基因的表达,cIAP1基因表达下调能在一定程度上抑制卵巢癌Skov3细胞的体外增殖能力及细胞侵袭能力。
中图分类号: